Allium test

Allium test jednostavan je test za otkrivanje toksičnoga djelovanja različitih tvari na stanice korjenčića luka. Test je dobio naziv po tome što se kao testni organizam koriste lukovice različitih vrsta luka iz roda Allium. Ovim testom može se promatrati učinak tvari koje onečišćuju okoliš na kromosome stanica luka, a dobiveni rezultati mogu poslužiti i kao početna točka za istraživanja štetnoga djelovanja tih tvari na stanice ostalih organizama, uključujući čovjeka.

Postupak:

Odaberite svježu čvrstu lukovicu češnjaka i nožićem uklonite donji dio na kojem se nalaze suhi korjenčići. Zatim postavite češnjak na čašu ispunjenu vodom tako da je dio gdje su se nalazili korjenčići uronjen u vodu. Češnjak neka bude tako uronjen u vodu idućih tjedan dana. Po potrebi možete dodavati vodu da bi korjenčići cijelo vrijeme bili uronjeni u vodu.

Slika 1.: Postavljanje češnjaka na otopine

Slika 2.: Korjenčići češnjaka nekoliko dana nakon postavljanja pokusa

Češnjak čiji su korjenčići uronjeni u vodu kontrolna je skupina u ovome pokusu. Zašto je važno u pokusu imati kontrolu?

Vaš zadatak je odrediti nezavisnu varijablu i osmisliti eksperimentalne skupine ovisno o tvarima čiji učinak na mitozu želite istražiti. Možete testirati učinak različitih tvari iz kućanstva koje dospijevaju u prirodu, poput deterdženata za rublje i posuđe, sredstava za čišćenje prostorija ili osvježivača prostora. Kada se odlučite za tvar čiji ćete učinak istraživati, pripremite otopine različitih koncentracija te tvari i češnjak na isti način izložite tim otopinama kao što ste kontrolnu skupinu izložili vodi.

Zavisna varijabla pokusa

Štetan učinak odabranih tvari na korjenčiće luka možete pratiti na nekoliko načina:

1. Mjerenje dužine korjenčića

Ravnalom izmjerite duljinu svih korjenčića pojedinih češnjeva češnjaka. Izračunajte srednje vrijednosti duljine korjenčića i zabilježite rezultate koje možete prikazati tablično ili grafički.

2. Određivanje mitotskog indeksa

Mitotski indeks jest postotak stanica koje se nalaze u mitozi u odnosu na ukupan broj promatranih stanica. Promotrite preparat korjenčića luka pod imerzijskim objektivom, pregledajte trideset stanica i odredite mitotski indeks za svaki češanj češnjaka.

3. Promatranje oštećenja na kromosomima

Promatranjem stanica koje su u procesu mitoze mogu se uočiti promjene na kromosomima poput lomova kromosoma. Promotrite nekoliko stanica u različitim fazama mitoze i usporedite ih sa stanicama na slici u potrazi za oštećenjima kromosoma.

 

Slika 3.: Stanice korjenčića luka u različitim fazama staničnoga ciklusa

Da biste mogli odrediti mitotski indeks i promotriti promjene na kromosomima, potrebno je pripremiti mikroskopski preparat korjenčića luka na sljedeći način:

• Odrežite vršne dijelove korjenčića češnjaka duljine oko 1 cm i stavite ih u epruvetu s bojom (1-2% otopina karmina ili orceina u 45% octenoj kiselini).
• Lagano zagrijavajte sadržaj epruvete provlačenjem epruvete kroz plamen dok se ne pojave prva dva mjehurića. Budite oprezni i koristite zaštitne rukavice i naočale.
• Prebacite boju s korjenčićima u malu Petrijevu zdjelicu te ju poklopite da biste izbjegli udisanje kiselinskih para.
• Na predmetno staklo stavite kap vode i sa strane polegnite obojeni komadić korijena od kojega ćete otkinuti samo vršni dio (oko 1 mm) i staviti ga u boju.
• Zaobljenim krajem olovke lupkajte po vršku korijena da se raspadne u nekoliko manjih dijelova.
• Pokrijte pokrovnicom preko koje ćete položiti od dva do tri sloja filter papira i pažljivo pritisnite jagodicom palca, tako da se upije višak boje, a stanice rasporede u jedan sloj.
• Ovako pripremljeni mikroskopski preparat promotrite imerzijskim objektivom svjetlosnoga mikroskopa.

O rezultatima provedenog istraživanja pripremite kratak izvještaj koji sadrži sva poglavlja pisanoga znanstvenoga rada.